生命科學的研究已進入了細胞組學的研究，科學家們渴求探究細胞深層次和綜合性信息，既提供細胞群體的群體信息，也關注個體細胞的差異，既能看到細胞表型的特點，更能研究細胞的功能，但目前的流式細胞技術已無法滿足科學家們的應用需求。Merck Millipore公司2012年推出的FlowSight多維全景流式細胞儀一次實現(xiàn)了從群體到個體，從表型到功能的綜合細胞分析，流式細胞技術進入了嶄新的時代。
 

FlowSight是下一代專家級流式細胞儀
FlowSight是一款體積小巧，但是功能強大的下一代專家級流式細胞儀。該系統(tǒng)革命性地設計提高了信噪比以及熒光檢測的靈敏度。標配12個檢測通道，除了傳統(tǒng)熒光強度信息，還能獲得“每個細胞”的明場、暗場以及10個熒光圖像。FlowSight可以多配置四根激光管（405, 488, 561, 642 nm），并加配785nm激光器于SSC信號檢測，同時還可配置96孔板自動上樣系統(tǒng)（AutoSampler）。FlowSight具有低于10MESF的超高檢測靈敏度，特別對于弱信號的檢測，有明顯的優(yōu)勢。
 

FlowSight突破傳統(tǒng)流式局限，實現(xiàn)圈門不再靠猜
FlowSight與其他傳統(tǒng)流式細胞儀不同之處在于它帶來了每個細胞的真實圖像。對于每個細胞，它能夠生成12張圖片。所獲得的圖片能夠鑒別來自細胞質、細胞膜和細胞核的熒光。您只需點擊散點圖中的每個點或直方圖中的每個點，即可查看與之對應的細胞圖片。因此使用者再也不用靠猜測來判斷設門是否準確。在FlowSight中，設門后，使用者可以通過觀察所設門內(nèi)外的細胞圖片來確認設門是否準確。

FlowSight拓展了流式細胞技術的應用范圍，獲得好的深入的細胞信息
1. 細胞周期細化分析
FlowSight可以將細胞周期分析和有絲分裂細胞分析結合起來。如下圖所示，研究人員利用FlowSight對THP-1細胞周期進行分析（如下圖左圖所示），通過觀察每個時期的細胞圖片，F(xiàn)lowSight不僅可以分析細胞的G0/G1,S,G2/M期，還可將M期細分為分裂前期，中期，晚期，末期，獲得全面的細胞周期數(shù)據(jù)。
 

2. 八色免疫分型
免疫分型通常用來鑒別血細胞亞群。FlowSight多能夠同時檢測10色熒光，大程度地滿足研究者的實驗需求。在這個例子中，研究人員用抗CD45, CD14, CD16, CD19, CD3, CD4和 CD123的抗體以及DAPI染料對細胞進行標記。通過一系列設門分析，他們鑒別了以下細胞類群： (A) CD3+ T細胞, CD4+ 輔助T細胞; (B) CD16+ 粒細胞; (C) CD19+ B 細胞; (D) CD14+ 單核細胞; (E) CD123+ pDC/嗜堿性粒細胞.

3．NFkB核轉位研究
NF-κβ作為一種廣泛存在的轉錄因子，被激活由胞漿轉入胞核，從而參與炎癥反應、免疫反應、細胞凋亡、腫瘤發(fā)生等。可以將細胞核和NF-κβ分別用DAPI和FITC染色，F(xiàn)lowSight可觀察每個細胞是否發(fā)生 NF-κβ核轉位，并量化分析NFkB核轉位程度以及發(fā)生核轉位細胞的比例。

FlowSight革命性地光路設計，實現(xiàn)*應用
FlowSight系統(tǒng)平臺也是由液流系統(tǒng)，光學系統(tǒng)和電子系統(tǒng)等三大部分組成。液流系統(tǒng)將樣本細胞懸液和系統(tǒng)鞘液注入流動室中，使細胞在鞘液流的約束下聚焦在液流的中心，逐個流過檢測窗口。光學系統(tǒng)中光源照射通過檢測窗口的細胞，從而產(chǎn)生光信號。光源分為兩種，其一用于產(chǎn)生明場細胞圖像，另一種是用于產(chǎn)生熒光細胞圖像的激光器。光源照射細胞產(chǎn)生的光信號被大數(shù)值孔徑的物鏡收集，然后通過光路系統(tǒng)傳遞到由二向色鏡構成的濾光片堆棧（Dichroic Filter Stack）。光信號在這里被分成不同波段投射到TDI CCD的相應檢測通道上，產(chǎn)生一個明場細胞圖像，一個暗場細胞圖像（Side Scatter，SSC）及至多10個不同熒光通道的細胞圖像。FlowSight的光路系統(tǒng)能夠自動調(diào)整焦距，并實時測定細胞運動速度，而其采用高航空遙拍CCD進行信號采集，信噪比比PMT提高10-20倍，上述這些手段保證了系統(tǒng)采集到的細胞圖像的質量和熒光信號的靈敏度。

 
綜上，F(xiàn)lowSight多維全景流式細胞儀，采用革命性的技術，解決了傳統(tǒng)流式細胞儀無法獲得細胞個體信息的局限，真正讓流式細胞儀睜開了“眼睛”，不僅可以對大量細胞進行統(tǒng)計學分析，而且還能觀察細胞形態(tài)，大地拓展了傳統(tǒng)流式細胞儀的應用。雖然FlowSight是在2011年推出的，但是Amnis公司的下一代流式技術已經(jīng)非常成熟，裝機已經(jīng)超過200臺，超過300篇文獻發(fā)表，其中大量Nature、Science和Blood等高水平文章。
 

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